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松杉靈芝對過敏免疫反應之調節研究
The Regulatory Effects of Ganoderma tsugae on Allergic Immune Responses
陳妙齡
國立台灣大學微生物與生化學研究所
 
【摘 要】
本研究首先為建立具有調節過敏免疫反應之食材的研究篩選模式,並評估其功效及可能的作用機轉。已知多數菇菌類食材對於免疫反應具有活化及調節之作用,故本實驗首先採用巴西洋菇、茯苓、樟芝與松杉靈芝等菇菌類為測試樣品,先以RBL-2H3肥大細胞株釋放組織胺能力、初代T細胞或TCR基因轉殖鼠分離出的T輔助細胞 (簡稱OVA特異性T細胞)分泌細胞激素能力,評估調節免疫功效。結果顯示,巴西洋菇、茯苓與松杉靈芝對組織胺的釋放無顯著影響,樟芝則促進組織胺釋放。此外,菇菌樣品均可促進T輔助細胞生成IL-2,且會抑制引發過敏疾病之Th2細胞激素的分泌。再以巴西洋菇、茯苓與松杉靈芝樣品餵食OVA致敏小鼠,結果顯示,三種菇菌樣品均可以降低呼吸道嗜伊紅白血球的聚集、IL-5的分泌與總蛋白質的濃度,對於脾臟細胞IL-4與IL-5的分泌,亦有抑制作用。因此,評估食材對過敏免疫反應之調節作用,以未分化的OVA特異性T輔助細胞,加入待測食材培養,分析分化過程中Th1與Th2細胞激素分泌量,為較準確且省時的篩選方式。
接著以細胞培養的方式初步探討松杉靈芝有效減緩過敏反應之成分為何。先以RAW264.7巨噬細胞分泌TNFa、RBL-2H3肥大細胞釋放組織胺、EL4 小鼠T細胞株或OVA特異性T細胞分泌細胞激素、及含IL-4 promoter質體轉染之T細胞報導基因表現等,評估松杉靈芝多醣類與三萜類區分物對過敏免疫反應之調節。結果顯示,松杉靈芝多醣與三萜類可以顯著的活化RAW264.7分泌TNFa。多醣類對於肥大細胞釋放組織胺無顯著影響,但三萜類可以顯著抑制組織胺的釋放。松杉靈芝在T細胞分化過程中,多醣類對Th1細胞的活化能力高於三萜類,三萜類對引發過敏疾病之Th2免疫反應的抑制效果較佳。松杉靈芝多醣與三萜類均不影響IL-4 promoter下游的報導基因表現 (luciferase activity),但三萜類可以顯著的抑制EL4細胞分泌IL-4與IL-5。本實驗另採用含NF-kB接合位的質體,探究NF-kB轉錄活性與IL-4生成之相關性,結果顯示,松杉靈芝三萜類可以顯著的抑制NF-kB下游報導基因表現,若在PPARg拮抗劑與三萜類區分物共同培養下, IL-4分泌受抑制的情形,則有回復的現象。由此得知,對於過敏性免疫反應而言,三萜類是松杉靈芝中較有效抑制Th2免疫反應之區分物。
為探討松杉靈芝三萜類對體內T細胞調節的影響,以及是否能夠減緩氣喘性過敏免疫反應。本實驗接著以OVA進行腹腔注射與吸入性致敏,誘發過敏性氣喘小鼠研究模式進行動物實驗,並以固醇類藥物prednisolone為對照組。結果顯示,松杉靈芝三萜類補充可以顯著減緩呼吸道過度反應 (AHR),減少免疫細胞在肺沖洗液及呼吸道週邊組織的聚集、降低肺沖洗液中IL-5、eotaxin、IL-4與IL-13含量,以及減緩氣喘之局部性發炎的作用,與固醇類藥物類似。同時三萜類對血清特異性IgG1抗體生成,與脾臟細胞分泌IL-4及IL-5也有抑制作用;但對血清IgG2a,及脾臟細胞生成Th1細胞激素,則無顯著影響。由以上結果得知,松杉靈芝三萜類可以顯著減緩氣喘小鼠呼吸道過度反應與發炎反應,亦可以顯著的抑制Th2免疫反應,但不影響Th1免疫反應。
綜合本研究之結果得知,由RBL-2H3肥大細胞、OVA特異性T細胞、EL4 T細胞株至動物實驗,松杉靈芝尤其是三萜類可有效的抑制組織胺釋放、呼吸道發炎介質生成、減緩氣喘小鼠呼吸道過度反應、抑制Th2細胞激素分泌,與OVA特異性IgG1生成,但不影響Th1免疫反應,顯示松杉靈芝三萜類可以主要抑制氣喘的過敏免疫反應。推論松杉靈芝三萜類可透過PPARg活化,抑制NF-kB之轉錄活性與Th2免疫反應,具有開發為較具安全性的輔助治療氣喘用藥之潛能。