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靈芝屬菌株抗衰老活性成分之開發研究(一)
計劃主持人:許瑞祥
共同執行:Jean-Marc Moncalvo
        王惠芳
        張立人
國立台灣大學微生物與生化學研究所
 
【摘 要】

壹:菌種鑑定與類緣關係之試驗

【摘要:】
  靈芝(Ganoderma) 自古為我國滋補強壯、扶正固本的珍貴藥材,並有久食輕身不老的記載。現代的研究成果顯示靈芝的代謝物中除具有增強免疫力、抗腫瘤等活性成分,亦可分離出特殊之多糖體,經證實此多糖體可改善年老動物免疫功能缺陷,增進衰老機體之生理功能,具有抗衰老作用而成為重要的藥用真菌。文獻中顯示無論就成分分析、藥理研究或靈芝栽培與生產等皆以靈芝G.lucidum和松杉靈芝G.tsugae為主,但目前就G.lucidum和G.tsugae菌株鑑定尚缺乏明確的分子生物學分類指標。本研究即應用RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)技術探討G.lucidum和G.tsugae種源關係o本法乃是利用五種合成引子進行聚合酵素連鎖反應(Polymerase Chain Reaction ,PCR)產生靈芝屬菌株全基因多型性圖譜,可有效鑑定靈芝和松杉靈芝,更可進一步經電腦程式Systet分析,結果顯示利用RAPD技術可將G.lucidum RZ、0626、270.81、32471、33217、430.84、46755、5.65,及G.tsugae BLC、J2、1109、223.48、282.33、428.84、46754等菌株在種間和種內關係做明確的判定o配合比對靈芝屬菌株rDNA定序結果,將可建立以分子生物學指標為基礎的分類系統。


貳:抗衰老活性物質之篩選試驗

【摘要:】
  靈芝(Ganoderma) 自古為我國滋補強壯扶正固本的珍貴藥材,並有久食輕身不老的記載。現代的研究成果顯示靈芝的代謝物中除具有增強免疫力、抗腫瘤等的活性成分而成為重要的藥用真菌,但對於抗細胞老化的證據較少。近年來有關自由基(free radical)的研究發現其與基因突變、細胞老化、死亡有關,而消除過多的超氧自由基成為好氧性生物延遲細胞老化的重要機制之一。其中超氧歧化酵素(superoxide dismutase,SOD)為好氧性生物體內抗超氧自由基毒害的防衛酵素,因此有關SOD在生理及醫藥應用的角色廣受重視。
  本研究以靈芝屬中(Ganoderma lucidum, G.appalanatum, G.boninese, G.formosanum,G.microsporum,G.tropicum,G.tsugae,G.neo-japonicum,G.japonicum)9個種共23株菌株品系為材料,探討在不同生長時期的超氧歧化酵素(Superoxide dismutase;SOD)活性變化,結果顯示:
 (1)G.boninense在經七天培養後有Cu/Zn-SOD活性被測出。
 (2)利用10%聚丙醯烯胺膠體(Polyacrylamide Gel Electropheresis;PAGE)電泳,在100Volt下電泳7小時後經活性染色所得Mn-SOD同功酵素圖譜顯示七株不同來源的 G.lucidum菌株間在不同生長時期有明顯的差異變化。
 (3)由Mn-SOD同功酵之圖譜分析結果可以區別G.tsugae、 G.tropicum、G.formosanum、G.applanatum、G.neo-japonicum各種。

有關SOD同功酵素之多樣性對靈芝屬菌株在生長時期、菌種分類鑑定和系統發生及演化之意義則仍在探討中。