第一屆
全國靈芝學術研討會

特別演講:

演講主題

發表者

靈芝的抗人類免疫缺失病毒活性 Pres. Of Biochemical Society of Republic of Korea Byong Kak Kim
利用活體外分析系統評估靈芝的生理活性 Professor of Toyama Medicaland Masao Hattori
靈芝免疫調節作用與抗腫瘤活性之關係 台北榮民總醫院醫學研究部

國立陽明大學微免研究所

王聲遠教授
現階段靈芝臨床研究的侷限和展望 史基紀念癌症中心內科

康乃爾醫學院

張毅生醫師
靈芝精華抗老效果 中國上海師範大學 楊慶堯教授
靈芝作為機能性食品優於藥品嗎? Tamura 衛生技術學院 Tsutomu Tamura
靈芝群(Ganoderma Lucidum Complex)的分子生物鑑定系統 台灣大學農化系 許瑞祥副教授
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Byong Kak, Ha Won Kim*, Eung Chil Choi

Department of Microbial Chemistry, College of Pharmacy   

Seoul National University, Seoul 151-742, Korea

*Department of Pathology & Laboratory Medicine

Hospital of the University of Pennsylvania

Philadelphia, PA 19104, U.S.A.

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tabcg1.gif (807 bytes)   靈芝子實體的水抽出液,分成高、低分子量兩部份。水萃取之
後的子實體再用甲醇萃取,此萃取物依其電荷分為八部份。兩種萃
取物的各個部份,於不同濃度下用於對人類 T 類淋巴母細胞
(CEM-IW)進行XTT抗病毒分析,此試驗顯示活體外人類免疫缺失
病毒(HIV-1,Ⅲb變體)之細胞病變作用。此試驗使用一種
tetrazolium試劑,該試劑可被活細胞代謝還原成一種可溶性、有色之
formazan 產物,此產物可藉光電比色計,於450奈米測量定量之,由
產物的吸光值(OD),可計算未受病毒感染細胞之50%抑制濃度
(IC_50),受病毒感染細胞之50%有效保 護濃度(EC_50)及活體
外治療指數(TI, IC_50/EC_50)。在每一分離部份的存在下,藉由測
量用HIV-1(HXBC2 病毒株)感染之Jurkat T 淋巴細胞之上清液中 的
病毒反轉錄梅(RT)活性,與對照組比較,也能分析病毒的增生。
以高於125.0 微克/毫升的高分子量部份(GL-HMW)處理,計算
IC_50及EC_50值,顯示於此高劑量下對標的細胞沒有毒性,也沒有
抗病毒活性。相反地,用低分子量部份處理 ,分別求其IC_50、
EC_50及TI值,各為125.0微克/毫升,11.0∼11.2微克/毫升 及大於
11.1∼11.3微克/毫升。顯示此低分子量部份對標的細胞沒有細胞毒
性, 但是對病毒增生卻有很強的抑制作用。甲醇粗抽出物(GLA)
顯示IC_50是43.6∼ 44.4微克/毫升,EC_50是14.4∼43.6微克/毫升
,TI值是1.0∼3.1。因此此抽出物具有很強的抗病毒活性,正己烷層
(GLB)之IC_50是21.5∼22.4微克/毫升, EC_50是15.2∼21.5微克
/毫升,顯示此部份也具有強抗病毒活性。乙酸乙酯層 (GLC)之
IC_50是27.1∼29.3微克/毫升,EC_50為27.1∼29.3微克/毫升,水
可溶部份(GLD),其IC_50及EC_50都大於125.0微克/毫升,顯示
沒有細胞毒性 ,也沒有抗病毒活性。中性部份(GLE)之IC_50是
14.8∼15.0微克/毫升,EC_50 是14.8∼15.0微克/毫升,顯示此部
份具有強細胞毒性,也有優異的抗病毒活性 。酸性部份(GLF)包
括靈芝酸及其衍生物,其IC_50及EC_50都大於125.0微克/ 毫升,
顯示沒有細胞毒性,也沒有抗病毒活性。鹼性部份(GLG)IC_50
為22.4∼ 24.6微克/毫升,EC_50為22.4∼24.6微克/毫升,顯示具
有優異抗病毒活性。兩性部份(GLH)之IC_50及EC_50都大於125.0
微克/毫升,顯示沒有細胞毒性,也不具有抗病毒活性。在反轉錄
梅分析中,GLC以50微克/毫升之劑量與Jurkat T淋巴細胞一起培養
3天之後,可抑制病毒增生達75%。GLG以100微克/毫升之劑量處
理,培養3天之後,與對照組比較,病毒增生抑制作用達66%。這
些結果與 XTT分析結果一致,即GLC及GLG兩部份,在兩種試驗中
,使用不同的HIV-1病毒株 及不同的 T 淋巴細胞,都能抑制病毒增
生。這顯示靈芝之非正己烷部份及鹹性部份都有明顯的抗病毒成份
。在本研究中一個有趣的發現是:屬於靈芝酸及其衍生物的酸性部
份(GLF),並無任何抗病毒活性。在熱水萃取物中,只有低分子
量部份抑制病毒增生。在甲醇萃取物中,中性及鹼性部份都發現能
夠抑制病毒增生,顯示靈芝子實體有幾種成份能抑制人類免疫缺失
病毒增生。
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利用活體外分析系統評估靈芝的生理活性
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Masao Hattori

Research Institute for Traditional Sino-Japanese Medicines

Toyama Medical and Pharmaceutical University, Japan

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tabcg1.gif (807 bytes)   為了評估靈芝子實體的生物活性,使用培養之心肌細胞及酵素
系統,研究靈芝抽出物及其成份。
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tabcg1.gif (807 bytes) 靈芝抽出物對培養之心肌細胞的作用
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tabcg1.gif (807 bytes)   培養之心肌細胞是研究心臟活性劑的有用系統。經由跳動頻率
、收縮力及其他參數的變化,可靈敏地偵測出其作用。我們以微電
腦驅動攝影分析方法,開發出一種新的心肌細胞活動監測系統,並
將其運用在不同的心臟活性劑,及傳統醫藥系統中,用於治療心臟
衰竭之粗藥物抽出物。
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tabcg1.gif (807 bytes)   靈芝子實體之正己烷與甲醇抽出物能夠顯著地降低心跳速率,
後者效力更強。兩種抽出物及水抽出物均有增加心跳振幅的傾向。
從抽出物分離出來的成分中 ,靈芝酸S1、portensterol及
ganodermanontriol均顯著增加心跳振幅, ganodermanontriol最能有效
地增加心跳振幅,但也明顯地降低心跳速率。
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tabcg1.gif (807 bytes) 靈芝抽出物對由齲蛀細菌(鏈球菌)
產生葡萄糖移轉梅的作用
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tabcg1.gif (807 bytes)   鏈球菌(Streptococcus mutans)會產生葡萄糖移轉梅,這種酵素在
蔗糖存在下,會催化黏稠葡聚糖的形成。然後鏈球菌細胞就會粘附
在牙齒的光滑表面上。這種粘附的細菌藉著產生有機酸的作用,引
起牙齒蛀蝕現象。為了開發抗蛀牙劑,我們試驗各種不同的粗藥物
抽出物抑制鏈球菌細菌粘附到光滑表面的作用,發現靈芝之甲醇抽
出物能有效地抑制細胞粘附。此外,靈芝的甲醇抽出物也能有效地
抑制葡萄糖移轉梅,乙酸乙酯抽出物最能有效抑制此酵素。分離之
成份中,靈 芝酸S1、ganodermanontriol、靈芝酸C2都能強烈地抑制
此酵素的作用。
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tabcg1.gif (807 bytes) 靈芝抽出物對人類免疫缺失病毒(HIV)蛋白梅的作用
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tabcg1.gif (807 bytes)   後天免疫缺失症候群(AIDS)是由人類免疫缺失病毒(HIV)
所引起的。這種病毒具有一些特殊酵素,例如:反轉錄梅(reverse
transcriptase)、RNase H 、integrase、蛋白梅,這些酵素是此病毒複
製所必需者。因此,這些酵素便成了開發抗AIDS藥物之標的物,尤
其蛋白梅(天門冬酸蛋白梅)在特定的胺基酸序列中,能夠使病毒
多蛋白(polyproteins)斷裂,以形成功能性蛋白質或酵素。我們篩
選各種植物抽出物,研究其對重組合HIV蛋白梅的抑制作用,結果
發現靈芝的甲醇抽出物能夠明顯地抑制酵素的活性。但是此抽出物
對反轉錄梅卻無抑制作用。
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tabcg1.gif (807 bytes) 靈芝抽出物對 C 型肝炎病毒(HCV)蛋白梅的作用
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tabcg1.gif (807 bytes)   C 型肝炎是世界上一個相當嚴重的問題,因為病毒帶原者轉變
成肝癌的比率相當高。這種疾病是因感染 C 型肝炎病毒(HCV)所
引起的。HCV是一種RNA病毒 ,能夠產生特異性蛋白梅(絲胺酸蛋
白梅),在成熟過程中能使病毒多蛋白斷裂 。在開發抗HCV劑的過
程中,我們研究靈芝甲醇抽出物對重組合HCV蛋白梅的作用。發現
甲醇抽出物能有效抑制該酵素,但水抽出物卻無任何抑制效果。
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tabcg1.gif (807 bytes)   總之,活動外生物分析,我們發現靈芝抽出物對培養之心肌細
胞的跳動具有心臟活化作用,同時也能抑制鏈球菌在牙齒表面形成
菌斑,對由人類免疫缺失病 毒(HIV)及 C 型肝炎病毒(HCV)產
生之病毒特異性酵素也具有抑制作用。雖然此處介紹之活動外生物
分析系統有某些限制,但是這些方法卻是用於篩選大量植物抽出物
,及其組成份的便利工具,只要取得小量即可篩選。

靈芝萃取物赤芝酸S作用於人類血小板之研究

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王成德教授—國立清華大學生命科學研究所

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tabcg1.gif (807 bytes)   將膠體過濾出的血小板培養在赤芝酸S(lanosta-7.9(11),24-trien-3β
,15-α- diacotoxy-26-oic asid)中顯示出,至少有80%的試劑會被細胞吸
收。這個吸收過程是一種簡單的擴散現象,分佈係數約為10^5,而此
種試劑在濃度高過20UM時,會促使血小板聚集。細胞凝集程度和試
劑濃度之間呈線性關係;而且,細胞凝聚的比例也和下列幾個現象的
上升有關:(1)細胞中游離的鈣離子濃度([ca 2+]i),(2)蛋白質磷酸化,
(3) 5-羥色胺(Serotonin)的釋出;它還和phosphoinositides的內轉換改變
有關。
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tabcg1.gif (807 bytes)   以掃描式電子顯微鏡(SEM)觀察顯示:血小板在低濃度氧化型三
■中,是外凸出針狀的圓板狀型態。在高濃度氧化型三■中,血小
板變成外凸絲狀之不規則球形的型態。血小板在試劑中的最初30秒
,細胞就變形成不規則的針狀,造成filopoodia伸長。除此之 外,當
赤芝酸S濃度>50UM時,血小板的膜出現小囊泡;因此氧化型三■
插入血小板的細胞膜可導致膜的型態改變。
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tabcg1.gif (807 bytes)   當赤芝酸S濃度<20UM,血小板的功用受到與時間和濃度相關因
子的抑制,試劑對刺激劑引發血小板反應的抑制能力大小為:ADP-
絲蛋白>膠原蛋白>凝血■,隨時間延長 ,血小板細胞型態開始變
得像有針狀的碟子,60分鐘後,脹得像馬鈴薯的樣子,進一步探討
與時間有關的抑制作用一氧化型三■抑制血小板對凝血■的反應發
現:
(1)細胞凝集被抑制的程度和[ca 2+]i;或標記蛋白質(marker protein)
的磷酸化有關;
(2)以[32P] P標記的血小板顯示因時間的延長,而對凝血■刺激的
P1P2的再合成和時間的延長成正比 (在first-2min時間進行條件下
的phosphoinositide內轉換)
(3)以SEM觀察顯示長期培 養下,血小板群有許多不對凝血■反應
的細胞不斷增加。這些結果告訴我們赤芝酸S抑制 thrombin對血小
板刺激反應在時間上的關聯性。
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利用HPLC分析:不同種靈芝屬子實體中含有肝臟保護作用之三帖類成分

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蘇慶華教授—台北醫學院微生物及免疫學科

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tabcg1.gif (807 bytes)   靈芝自古以來即為中國之珍貴藥材,目前已於研究中找出許多
具療效成分。近十年來成為研究重點的三帖類(Triterpenoids)在動物
實驗中具有多種生理活性,由於靈芝種類繁多,同時本研究室也發
現不同種類的靈芝在TIC(Thin Loyer Chromatography)圖譜上有不同之
三帖類模式。本研究的目的為利用TLC及HPLC探討台灣及美洲常見
的所有靈芝屬之三帖類模式,以期能提供分類學上之佐證;在研究
靈芝三帖類之生理活性方, 以本實驗室先前由松杉靈芝(G.tsugae)所
純化分離出的兩種具有抑制小白鼠急性肝障礙 效果之三帖類--
ganoderic acid, C2為標準,以HPLC進行分析比對,確知是否所有靈芝
均含有此類已知具肝臟保護作用之三帖類。
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tabcg1.gif (807 bytes)   靈芝為本實驗室所收集,農業試驗所提供,和由菌種保存及研
究中心(CCRC)所取得的子實體,共計71種,分別為:
G, neo-japonicum, G. formosanum, G. australe, G. calidophilum,
G. mastoporum, G. weberianum, G. pfeifferi, G. resinaceum, G. lucidum,
G. subamboinense var. laevisporum, G. boniense, G. tropicum,
G. fornicatum, G. tsugae, G. curtisii, G. lobatum, G. mirabile, G. oerstedii,
經由TLC及HPLC分析發現:不同種類的靈芝有顯著不同之三帖類
模式,共有18種不同之三帖類模式,除了G. lucidum因採集來源地
不同而有三種不同亞型外,其皆有相同之三帖類模式,顯示似乎可
以三帖類模式當作靈芝分類之佐證。同時由TLC及HPLC確知
G. lucidum, G. boniense, G. tropicum, G. fornicatum, G. tsugae, G. curtisii,
G. lobatum, G. resinaceum, G. mirabile及G. oerstedii均含有
ganoderic acid B, C2, 但含量不一,其中以G. lobatum所含
ganoderic acid B, C2最高。
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靈芝屬菌種鑑定系統的最新發展

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許瑞祥副教授—國立臺灣大學農業化學系

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tabcg1.gif (807 bytes)   靈芝自古為我國滋補強壯,扶正固本的珍貴藥材。近年的科學
研究成果顯示靈芝屬菌株的代謝物中,具有免疫能力增強、抗腫瘤
、抗過敏、降血糖、降血壓等的活性成分,而成為重要的藥用真菌
。文獻中顯示無論就靈芝的栽培生產、成分分析及藥理研究等皆以
靈芝Ganodema lucidum和松杉靈芝(G. tsugae)為主。由於高等真菌分
類的根據以子實體標本為基礎。因此有關菌種的分類與鑑定系統是
整合靈芝研究成果,健全未來發展的當務之急。
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tabcg1.gif (807 bytes)   本文中將探討過去十年來從靈芝屬菌株生長菌落的形態觀察開
始至今日分子生物學所探討的基因序列等過程,其中所根據的指標
有:
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tabcg1.gif (807 bytes) (一)形態特徵:
(1)菌落形態。
(2)菌絲體形態。
(3)厚壁孢子形態。
(二)生理特徵:
(1)生長速率。
(2)生長溫度範圍。
(三)生化特徵:
(1)API-ZYM胞外酵素分析結果。
(2)漆氧化■同功酵素圖譜。
(3)超氧歧化■同功酵素圖譜。
(四)生物種特徵:
(1)單雙核體菌株間之交配試驗。
(2)單一單核體菌株間之交配試驗。
(五)基因組成特徵:
(1)RAPD (Randem Amphified Polymorphic DNA)之
全基圖譜。
(2)核糖體基因(25s. rDNA)之序列分析。
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tabcg1.gif (807 bytes)   利用以上特性所建立的靈芝屬菌種鑑定系統,對於靈芝屬物種
的演化途徑和菌株間的類緣關係提供客觀的判斷指標,奠定靈芝屬
菌株間育種、栽培和活性成分比較時的基礎。
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